喆圖小編就來說說用索氏提取法測(cè)定粗脂肪含量的原理及操作,熟悉重量分析的基本步驟。
實(shí)驗(yàn)原理 :脂肪是丙三醇(甘油)和脂肪酸結(jié)合成的脂類化合物,能溶于脂溶性有機(jī)溶劑。
本實(shí)驗(yàn)利用脂肪能溶于脂溶性溶劑這一特性,用脂溶性溶劑將脂肪提取出來,借蒸發(fā)除去溶劑后稱量。整個(gè)提取過程均在索氏提取器中進(jìn)行,通常使用的脂溶性溶劑為億醚,或沸點(diǎn)為30℃~60℃的石油醚。用此法提取的脂溶性物質(zhì)除脂肪外,還有游離脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等,故稱為“粗脂肪”。同時(shí),樣品中結(jié)合狀態(tài)的脂類(主要是脂蛋白)不能直接提取出來,所以該法又稱為游離脂類定量測(cè)定法。 索氏抽提法測(cè)定脂肪大的不足是耗時(shí)過長(zhǎng),如能將樣品先回流1~2次,然后浸泡在溶劑中過夜;次日再繼續(xù)抽提,則可明顯提高提取率。
接下來喆圖小編就來說說實(shí)驗(yàn)操作前的一些準(zhǔn)備工作及步驟:
將電熱恒溫水浴鍋的水溫事先加熱(80℃)。務(wù)必保證提取管和燒瓶?jī)?nèi)干燥、潔凈;若否,將其洗凈并置于鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)120℃烘干。
1.折濾紙斗,取一張?11cm的濾紙,折成筒狀,再將其一端折起來封死,便做成了濾紙斗。
2.稱樣:先將數(shù)?;ㄉ嗜テ?,在碾缽中用碾錘*搗碎作為實(shí)驗(yàn)樣品。將濾紙斗在電子天平上稱重,然后用藥勺取2勺(約2g)樣品裝入濾紙斗中,把濾紙斗的開口處折起來封死;防止樣品泄出濾紙斗。調(diào)整濾紙斗的高度,使其放在抽提管中時(shí)略低于虹吸管的上彎頭處。將裝好樣品的濾紙斗放在電子天平上稱重,兩質(zhì)量之差即為樣品的質(zhì)量。
3.提?。簩⑺魇咸崛x,從下至上安裝。首先安裝好燒瓶,并調(diào)整其高度,使其剛好能浸入電熱恒溫水浴鍋中的水中。將裝置從水浴鍋的水中取出,繼續(xù)安裝提取管,把裝有樣品的濾紙斗放入提取管內(nèi),向提取管中緩緩倒入石油醚直至液面達(dá)到虹吸管上彎頭部,正好虹吸一次;再向提取管中倒入石油醚,使其液面達(dá)到次液面的一半。用乳膠管將冷凝管與自來水管相連,將冷凝管安裝到提取管上,檢查一下,確保所有接口均對(duì)接完好(不漏氣,不打滑)。輕輕打開自來水(冷凝用),將索氏提取儀整個(gè)裝置放入電熱恒溫水浴鍋中加熱提?。ㄋ疁?0℃左右)。提取時(shí)間2~4h,約虹吸20次以上,記錄每次虹吸所需的時(shí)間和虹吸次數(shù)。附注:若要將樣品的粗脂提取*,提取時(shí)間至少為12h以上。由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間的限制,我們的提取率只能達(dá)到80%左右。
4.回收石油醚:提取2h后,當(dāng)石油醚在提取管中的液面即將達(dá)到虹吸管的上彎頭處時(shí),從電熱恒溫水浴鍋中取出索氏提取儀裝置,室溫冷卻5~10min;取下平底燒瓶,將提取管的下端口插入回收瓶中,傾斜裝置,提取管中的石油醚會(huì)虹吸而流入回收瓶中,達(dá)到回收的目的。再裝上平底燒瓶,繼續(xù)放入電熱恒溫水浴鍋中加熱直至冷凝管下端無石油醚滴下,表明平底燒瓶中的石油醚已經(jīng)蒸干。注意:必須蒸干后才能放入鼓風(fēng)干燥箱烘干,否則會(huì)引起火災(zāi)。取下平底燒瓶,回收提取管中的石油醚。
5.稱量粗脂質(zhì)量:將平底燒瓶放入120℃的鼓風(fēng)干燥箱中烘15min,取出冷卻后稱重(須戴手套,以免燙傷)。再將平底燒瓶用洗滌劑洗凈,于120℃的鼓風(fēng)干燥箱中烘干(約15min),取出冷卻后稱重,兩者的質(zhì)量之差就是粗脂的質(zhì)量。
清潔
從提取管中取出濾紙斗,清洗提取管,整理好桌面上的儀器和試劑,并注意清潔自己的操作臺(tái)。
計(jì)算
樣品粗脂的含量(%)=(粗脂的質(zhì)量/樣品的質(zhì)量)*100%
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